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酶底物法大腸菌群檢測(cè)系統(tǒng)

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產(chǎn)品介紹

摘要:由于傳統(tǒng)方法在檢測(cè)水中大腸菌群和大腸埃希氏菌需要48小時(shí)左右,且操作過(guò)程復(fù)雜,難以掌握?,F(xiàn)介紹一種快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法,只需手工操作2分鐘,即可在24小時(shí)內(nèi)同時(shí)定量檢測(cè)出大腸菌群和大腸埃希氏菌。此方法大大的減少了工作量,避免了使用多管法的逐級(jí)稀釋帶來(lái)的操作誤差;也避免了使用濾膜法時(shí)肉眼讀數(shù)的人為誤差,所以其假陽(yáng)性率和假陰性率都比傳統(tǒng)方法低。由于24小時(shí)內(nèi)就得到結(jié)果,可以很好的用于突發(fā)事件應(yīng)急。

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1. 背景:
目前我國(guó)對(duì)生活飲用水、水源水、地表水等進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià),檢測(cè)的指標(biāo)為大腸菌群和大腸埃希氏菌或糞大腸菌群(耐熱大腸菌群),以這些指標(biāo)作為糞便污染的指示菌。采用的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法為膜過(guò)濾法和多管發(fā)酵法。但這兩種方法檢測(cè)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng),需4872小時(shí),需驗(yàn)證試驗(yàn),試驗(yàn)步驟較為繁瑣,所以不能對(duì)水的衛(wèi)生學(xué)狀況做出快速評(píng)價(jià)。因此,采用快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法十分必要。酶底物法可以較好的彌補(bǔ)傳統(tǒng)方法的不足。
主要內(nèi)容:
1
、實(shí)驗(yàn)原理
2
、儀器設(shè)備與試劑耗材
3
、實(shí)驗(yàn)步驟
4
、討論與分析
2.
原理:
酶底物法采用大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解ONPGOrtho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培養(yǎng)液呈黃色,以及大腸埃希氏菌產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解MUG4-methyl-umbelliferyl-β
-D-glucuronide
)使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的原理,來(lái)判斷水樣中是否含有大腸菌群及大腸埃希氏菌。酶底物法可以選用國(guó)標(biāo)中推薦粉狀培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)行簡(jiǎn)便的操作;無(wú)需確認(rèn)試驗(yàn);酶底物法檢測(cè)時(shí)間短,只需24小時(shí)即可同時(shí)定量出水樣中大腸菌群和大腸埃希氏菌的MPN值。

3. 試劑和設(shè)備:
3.1
試劑:采用酶底物法市售化的MMO-MUGMinimum Media ONPG-MUG)培養(yǎng)基。
3.2
耗材:取樣瓶或使用滅菌的玻璃;51孔定量盤(pán)或97孔定量盤(pán);
注:51孔定量盤(pán)可在無(wú)需稀釋的情況下檢測(cè)1200個(gè)目標(biāo)菌/100ml水樣;97孔定量盤(pán)可在無(wú)需稀釋的情況下檢測(cè)12419個(gè)目標(biāo)菌/100ml水樣。
3.3
設(shè)備:西安捷騁儀器儀表有限公司生產(chǎn)的程控定量封口機(jī);366nm紫外燈;陽(yáng)性對(duì)照物
注:定量程控封口機(jī)除了將定量盤(pán)進(jìn)行封口外還對(duì)100ml水樣平均分配到51個(gè)孔或者是97個(gè)孔中。
4.
操作方法:
4.1
定性檢測(cè):
4.1.1
適用范圍:
一般用于檢測(cè)飲用水、瓶裝水等;這些水樣的結(jié)果是不得檢出。所以只需用定性檢測(cè)就可滿足試驗(yàn)要求。
4.1.2
操作步驟:
1)
將一個(gè)試劑倒入裝有100ml水樣的無(wú)菌取樣瓶或無(wú)菌玻璃瓶中,混勻。
2)
放在36±1℃培養(yǎng)箱,培養(yǎng)24小時(shí);

注:如檢測(cè)耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)則需放在44.5℃,培養(yǎng)24小時(shí);如果培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)28小時(shí),則陰性結(jié)果則結(jié)果有效,如果為陽(yáng)性結(jié)果則結(jié)果無(wú)效,需重做此水樣。
3)
根據(jù)下面的結(jié)果解釋讀取結(jié)果
4)
無(wú)需確認(rèn)試驗(yàn)
4.2
定量檢測(cè)
4.2.1
適用范圍:適用于任何一種水體。
4.2.2
操作步驟:
1)
將一個(gè)試劑倒入裝有100ml水樣的無(wú)菌取樣瓶或無(wú)菌玻璃瓶中,混勻。
2)
將瓶?jī)?nèi)的水樣全部倒入51孔或者是97孔定量盤(pán)中,以手撫平定量盤(pán)背面以趕除孔穴內(nèi)氣泡,然后使用定量程控封口機(jī)進(jìn)行封口。
3)
將定量盤(pán)放在36±1℃培養(yǎng)箱,培養(yǎng)24小時(shí)
注:如檢測(cè)耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)則需放在44.5℃,培養(yǎng)24小時(shí);如果培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)28小時(shí),則陰性結(jié)果則結(jié)果有效,如果為陽(yáng)性結(jié)果則結(jié)果無(wú)效,需重做此水樣。
4)
根據(jù)下面的結(jié)果解釋讀取結(jié)果。數(shù)出陽(yáng)性格子數(shù)后對(duì)照MPN表得到結(jié)果。
5)
無(wú)需確認(rèn)試驗(yàn)
5.
測(cè)量范圍
5.1
最低檢出限
試劑可以在24小時(shí)同時(shí)檢測(cè)出總大腸菌群和大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群(糞大腸菌群),它可以在100ml水樣中抑制2百萬(wàn)個(gè)雜菌干擾,最低檢出限為每100ml水樣可檢測(cè)出1cfu的總大腸菌群,大腸埃希氏菌,耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)。
5.2
選用51孔定量盤(pán)
在不稀釋的情況下,100ml水樣可檢測(cè)200個(gè)總大腸菌群,大腸埃希氏菌,耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)。
5.3
選用97孔定量盤(pán)
在不稀釋的情況下,100ml水樣可檢測(cè)2419個(gè)總大腸菌群,大腸埃希氏菌,耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)。

6 檢測(cè)水樣的范圍


飲用水、源水、瓶裝水、中水、二次供水、管網(wǎng)水、廢水、食品水、畜牧用水、醫(yī)療用水


7
.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需注意的地方


如果樣品有背景顏色,請(qǐng)做一個(gè)空白實(shí)驗(yàn),與結(jié)果相比較,如果樣品被稀釋,則在讀取MPN表時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),只可使用純水,不含緩沖的水,不含

氧化劑的水進(jìn)行樣品稀釋,如果樣品中含有過(guò)多的氯,則在加入Colilert時(shí)會(huì)顯藍(lán)光,此時(shí)樣品應(yīng)被終止檢測(cè)。


8.結(jié)論


總大腸菌群細(xì)菌主要由以下4個(gè)菌屬細(xì)菌組成:埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。這些菌屬可以在人、畜糞便中檢出,有的也可以在營(yíng)養(yǎng)豐

富的水體中檢出,即非糞便污染的情況下,也有檢出這些細(xì)菌的可能性。糞大腸菌群組成與總大腸菌群組成相同,但主要組成是埃希菌屬,在此菌屬中與人類

生活密切相關(guān)的僅有一個(gè)種,即大腸埃希氏菌;檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬所占數(shù)量較少。作為糞便污染的指示菌,大腸埃希氏菌檢出的意義最大,

其次是糞大腸菌群,總大腸菌群的檢出意義略差一些。


酶底物法操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)時(shí)間短,可在24小時(shí)內(nèi)同時(shí)檢測(cè)水中大腸菌群和大腸埃希氏菌的污染狀況且無(wú)需確認(rèn)試驗(yàn);減少了傳統(tǒng)方法中人為操作

的誤差,能夠更準(zhǔn)確地判斷水樣的微生物污染狀況;作為國(guó)家飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的新方法,不但可以用于水樣的例行檢測(cè),更可作為應(yīng)急突發(fā)事件的必備試劑。